Los tres pasos de la PCR

PCR es un proceso de amplificación. Con el fin de generar muchas microgramos de un ácido nucleico dado, debe, por supuesto, tener el ADN de interés, denominado una plantilla. Puede provenir de cualquier fuente - animales, plantas, virus o bacterias. (ARN se puede analizar usando PCR, pero hay que utilizar primero la enzima viral transcriptasa inversa para generar una copia de ADN del ARN a continuación, puede utilizar esa copia de ADN como molde.) Para la PCR, debe tener un calor forma la resistencia de la enzima DNA polimerasa, en general, Taq polimerasa, que hace que las nuevas cadenas de ADN. También es necesario secciones cortas primers- de ADN que se unen a puntos específicos en la plantilla y tocan la replicación de esa porción de la plantilla. Por último, es necesario dNTPs, los nucleótidos usados ​​para construir las nuevas cadenas, y una solución salina específico, denominado almacenamiento intermedio, en el que para realizar la PCR. Esto ayuda a estabilizar los reactivos y los productos de la reacción.

El primer paso en la PCR se desnaturalización de la plantilla de ADN, lo que significa descomprimir las dos hebras que, unidas entre sí, forman la estructura de doble hélice del ADN. En el caso de PCR, la plantilla se calienta brevemente a entre 92 ° a 95 ° C, lo suficientemente caliente como para romper los enlaces de hidrógeno que mantienen DNA en su forma de doble hélice característica y separarlo en dos cadenas sencillas.

Video: RCP básica en tres pasos | Pasos para salvar una vida | Vídeos de Medicina Clara con el Dr. Bueno

Después de desnaturalización se haya completado, la mezcla se enfría a una temperatura tan baja como 45 ° C. Esto permite que los enlaces de hidrógeno para formar entre pares de bases de nucleótidos complementarios de la plantilla de ADN y los cebadores de ADN, con la unión de adenina a timina y citosina a guanina. La temperatura de hibridación se determina basándose en lo que se conoce acerca de la plantilla de ADN y la secuencia del cebador. Por ejemplo, si la amplificación de un gen de un mosquito, si usted tiene cebadores de una especie de mosquitos en el mismo género, puede tener un mayor con temperatura de recocido si la única secuencia disponible es de una mosca de la fruta, la temperatura de recocido tendrá que ser más bajos porque las secuencias se correspondan menos perfectamente. El recocido se produce de forma rápida y eficiente debido a que es mucho más ADN cebador de ADN molde en la mezcla, sobre todo al principio.

Una vez ha tenido lugar la hibridación, una forma estable al calor de la ADN polimerasa interviene para comenzar la adición rápida, secuencial de los nucleótidos a las cadenas de cebador - 50 a 100 nucleótidos por segundo. Para poner esto en marcha, se calienta de nuevo la mezcla, esta vez a un más modesto 72 ° C.

Video: Genética EJERCICIO RESUELTO DE BIOLOGIA

PCR es un proceso exponencial. Esto significa que, después de un ciclo, el doble de la cantidad original de ADN molde, existe- después de dos ciclos, cuatro veces la cantidad original existe- después de tres ciclos, ocho veces, y así sucesivamente.