Cómo realizar la secuenciación PCR
En los primeros días de análisis de ADN, que era de vital importancia para los investigadores y los investigadores de la escena del crimen para tener grandes muestras de ADN para ellos tener alguna posibilidad de subir con resultados útiles. Eso fue antes de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) secuenciación fue desarrollado. secuenciación PCR permitió a los científicos para amplificar regiones genómicas para el análisis. Gracias a la secuenciación de PCR, un investigador forense puede identificar un ser humano con sólo una décima parte de una millonésima parte de un litro - un microlitro 0,1 - de su saliva.
Video: "PCR del DNA" song
Calentar el ADN desconocido por lo que sus hebras apareadas se separan y las hebras individuales se pueden combinar con los cebadores de ADN.
Mezclar la plantilla de ADN con cloruro de magnesio, los nucleótidos de ADN y una gran cantidad de cebadores de ADN. El mayor número de cebadores asegura las cadenas de ADN no identificados se combinan con los cebadores y no uno con el otro. Se enfría la mezcla de reacción hebras tan solo se combinan con las cadenas de cebador.
Video: PCR o Reacción en Cadena de la Polimerasa (audio latino)
Video: Electroforesis de ADN en gel de agarosa (IQOG-CSIC)
Video: ¿Cómo funciona la secuenciación? (versión corta)
Añadir la ADN polimerasa. ADN polimerasa es una enzima que puede leer las hebras de ADN y extenderlos enganchando nucleótidos juntos, lo que crea copias de la primera muestra de ADN no identificado.
Añadir más cebadores de ADN y nucleótidos y repetir el ciclo. Repita hasta que haya suficiente ADN.
Consejos advertencias
- La cantidad de plantilla de ADN que necesita para secuenciar un PCR depende del tamaño del fragmento de PCR. Por ejemplo, una plantilla de 200 a 500 pares de bases requiere de 25 a 100 nanogramos de material de ADN.
- Antes de realizar una secuenciación de PCR, debe confirmar hay material de ADN en la muestra mediante el uso de una prueba de la placa bromuro de etidio. Este método mostrará todos, pero las muestras más pequeñas.
- Para visualizar la secuenciación PCR, colocar el producto final en un aparato de electroforesis en gel.
- Siempre que sea posible, mantener las concentraciones de ADN no identificado en la muestra lo más alto posible. Esto aumentará la calidad y fiabilidad de sus resultados de la secuenciación de PCR.