Como hacer cebadores de oligonucleótidos para PCR
Para la reacción en cadena de polimerasa para amplificar correctamente DNA, necesita dos cebadores correctamente realizadas, o cadenas cortas de nucleótidos que son complementarias a la primera parte del segmento de ADN que está siendo copiado. PCR se utiliza para una variedad de aplicaciones que van desde la aplicación de la ley a la ingeniería genética. Se trata de tomar una muestra de ADN de doble cadena, fundiéndolo para romper el ADN en hebras separadas, la fijación de los cebadores a las hebras individuales, y luego la extensión de los cebadores para formar dos piezas de DNA de doble cadena. Este proceso se repite con el fin de obtener una muestra varias veces la concentración de la original.
Contenido
- Video: forward and reverse, sense and antisense primers
- Video: tutorial para el diseño de primers genbank
El cebador directo que se van a realizar debe coincidir con el ADN en el lado opuesto, o la cadena complementaria. En otras palabras, debe consistir en los primeros nucleótidos de la secuencia de interés. El cebador inverso tiene que unirse al final de su gen de interés y imitar su hebra complementaria.
El uso de un procesador de textos o un programa más especializado para el ADN, mirar la secuencia de ADN que se desea amplificar. Tomar nota de las primeras 18-24 pares de bases y los últimos 18-24 pares de bases. No deben ser encontrados en otras partes de su muestra de ADN, lo que podría ser común para las áreas que se repiten. Si esto sucede, el resultado final será con su imprimación unión a múltiples áreas dentro de la muestra y los resultados de PCR de longitud variable.
Video: Forward and reverse, sense and antisense primers
Anote el primer y último segmentos de ADN que buscaba en el primer paso. Por ejemplo, digamos que la secuencia inicial fue ATGGAATTCACGATCGATCGT y el último fue GGGTGCGAACACGGACTTAG. En este ejemplo, estamos de cebado para el inicio y extremos de un gen particular.
Tomar la primera 18-24 secuencia de pares de bases (en el ejemplo, es ATGGAATTCACGATCGATCGT) y la inserta en otro documento para hacer que el cebador directo. Guardarlo con el nombre de la región de ceba para y el hecho de que es un cebador directo.
Anote los últimos 18-24 pares de bases de la secuencia de interés (GGGTGCGAACACGGACTTAG en el ejemplo) para crear el cebador inverso. Escribe los nucleótidos complementarios para la secuencia que representa el otro lado. Cada una de las cuatro bases de un pares de nucleótidos con una sola otra base: adenina (A) con timina (T) y citosina (C) con guanina (G). Una vez que tenga la otra hebra complementaria, que desea invertir el orden de todos los nucleótidos de la cadena por la reescritura en la dirección opuesta. Cuando esto se haya completado, tome su nueva secuencia complementado y revertido y guardarlo en un documento debidamente etiquetado.
Video: tutorial para el diseño de primers genbank
Ir al sitio de su proveedor y insertar la secuencia con la cuenta de facturación relevante (por lo general adjunta a un laboratorio), la concentración y cualesquiera otras modificaciones especiales. Realice su pedido.