Diferencia entre directo y ELISA indirecto
Un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) implica la reacción de un complejo anticuerpo-enzima con un antígeno o anticuerpo celebrada inmóvil sobre una superficie sólida. En la incubación de la enzima conjugado con un sustrato adecuado, se forma un producto. La formación de un producto ayuda a detectar la presencia de antígeno o anticuerpo y su cantidad proporciona una medida de la cantidad de reacción antígeno-anticuerpo que se produjo. La prueba ELISA puede realizarse de dos formas: directos e indirectos.
Contenido
- Formato de la prueba
- Facilidad de prueba
- Video: prueba elisa indirecta
- Video: elisa prueba de laboratorio paso por paso
- La rapidez de las pruebas
- Video: ¿cómo funciona la prueba elisa?
- Video: video elisa directa
- Sensibilidad
Formato de la prueba
En la prueba de ELISA directa, un anticuerpo primario se lleva a cabo en las paredes de una placa de microtitulación. Cuando se añade la muestra sospechosa de contener el antígeno, hay una reacción antígeno-anticuerpo. A continuación, un anticuerpo secundario ligado a enzima que es capaz de reaccionar con se añade el antígeno. Si el antígeno está presente en la muestra, se une a este anticuerpo ligado a enzima. Cuando se añade un sustrato incoloro, si se desarrolla un color, que indica la presencia de antígeno. En el ELISA indirecto, el antígeno se llevó a cabo en las paredes de la placa de microtitulación. Cuando se añade una muestra sospechosa de contener anticuerpos, una reacción antígeno-anticuerpo se produce. A continuación, se añade un anticuerpo secundario ligado a enzima capaz de reaccionar con la región no unido del anticuerpo. Cuando se añade el sustrato incoloro, que conduce al desarrollo de color si la muestra utilizada contiene anticuerpos.
Facilidad de Prueba
Video: Prueba Elisa Indirecta
Video: ELISA prueba de laboratorio paso por paso
Una amplia gama de anticuerpos secundarios marcados están disponibles comercialmente. Además, es posible crear varios anticuerpos primarios en una especie dada y utilizar el mismo anticuerpo secundario para la detección. Esto hace que el ELISA indirecto fácil de realizar. En el ELISA directo, los anticuerpos primarios tienen que ser específicamente preparado para reaccionar con el antígeno específico de la sospecha de estar presente en la muestra. Esto hace que el ELISA directo desventajosa en comparación con la prueba indirecta.
La rapidez de las pruebas
Video: ¿Cómo funciona la prueba ELISA?
Video: Video ELISA DIRECTA
La prueba ELISA directa es rápida en comparación con la prueba indirecta, ya que utiliza un único anticuerpo. El ELISA indirecto requiere una etapa adicional de incubación con un segundo anticuerpo durante el procedimiento de prueba, lo que provoca un retraso en la obtención de resultados.
Sensibilidad
La prueba de ELISA directa es menos sensible que la forma indirecta de la prueba debido a que es mucho menos amplificación de la señal. Además, el etiquetado del anticuerpo primario con una enzima puede alterar su perfil de immonoreactivity. En el caso del ELISA indirecto, el anticuerpo primario no está marcado y por lo tanto, conserva su inmunorreactividad. Además, cada anticuerpo primario tiene muchos epítopos que se pueden unir con el anticuerpo secundario que esto permite la amplificación de la señal, lo que mejora la sensibilidad del método. Sin embargo, existe la posibilidad de reactividad cruzada entre el antígeno y el anticuerpo secundario, que conduce a un error en los resultados. No existe tal posibilidad en el método ELISA directo.