Fuentes de error en la electroforesis del gel

La electroforesis en gel implica el uso de un gel por lo general hecha de polímeros tales como agarosa. El gel se sumerge en una solución tampón que lleva a cabo un campo eléctrico. La muestra de ADN de interés se fragmenta primero usando enzimas de restricción y después se inyecta en el gel. Cuando el campo eléctrico está activado, los fragmentos de ADN en el gel migran hacia el electrodo positivo. Si los fragmentos de ADN son de diferentes tamaños, entonces los tiempos de migración serán diferentes para cada fragmento de tamaño. Los fragmentos se visualizaron después usando un colorante o autorradiografía y son visibles como bandas en el gel.

La principal aplicación de electroforesis es como una herramienta para el análisis de ADN en biología molecular, pero también se utiliza en medicina forense como un medio de identificación de muestras de una escena del crimen. Es importante que las fuentes de errores en esta técnica pueden minimizar con el fin de obtener resultados precisos. Una fuente de error es la contaminación de la muestra de ADN. Si hay ADN extraño en la muestra, el gel tendrá más bandas que se encontraría en un gel que contiene sólo la muestra purificada.

La concentración del gel también debe ser correcta para evitar errores. Si la concentración es demasiado alta o demasiado baja, los fragmentos se migran demasiado lentas o demasiado rápido. Esto dará lugar a errores en la resolución de las diferentes bandas. Durante la ejecución de la electroforesis, se debe tener cuidado para asegurar que la tensión es constante. Cualquier fluctuación en la tensión de resultarán en la migración inestable de fragmentos de ADN, que conduce a errores en la lectura de las bandas. La solución tampón debe ser también de la composición correcta, como un tampón con el pH mal o concentración iónica va a cambiar la forma de los fragmentos de ADN, también el cambio de sus tiempos de migración.

Lo más importante, el gel debe ser visualizada correctamente. Si la concentración del colorante o sonda radiactiva utilizado para visualizar las muestras es demasiado alta, la imagen resultante será muy desordenado, como también serán visualizados fragmentos residuales. Si la concentración de gel es demasiado baja, no habrá visualización. Cuando los procesos correctos se han seguido durante todas las etapas, electroforesis en gel producirá resultados que son exactos y pueden ser utilizados con gran confianza. Como con todos los procedimientos científicos, electroforesis en gel puede ser propenso a errores, pero estos se pueden minimizar con la preparación y el manejo adecuado.