¿Cuáles son las desventajas de HPLC?

cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) es una técnica de laboratorio utilizado para separar e identificar compuestos. Es un tipo de cromatografía de columna que se basa en diferentes polaridades de los compuestos en una solución con el fin de separarlos. HPLC difiere de cromatografía en columna estándar, ya que utiliza presión para forzar la solución a través de la columna más rápidamente, y por lo tanto produce más rápido, y a veces más precisa, los resultados. El objetivo es separar los compuestos en la columna y hacer que salga por separado.

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Debido a la velocidad de HPLC y la dependencia de diferentes polaridades de compuestos, dos compuestos con estructura y polaridades similares pueden salir del aparato de cromatografía, al mismo tiempo o casi al mismo tiempo. Esto se conoce como coelución. Coelución hace determinar exactamente qué parte de la mezcla se eluyó en qué momento difícil.

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HPLC típicamente usa una columna de vidrio lleno de granos hechos de diferentes materiales. Las mezclas siendo forzada a través de la columna tienen productos químicos que se unen con diferentes puntos fuertes a las perlas. La fuerza de la unión, que depende de la similitud en la polaridad, determina el tiempo que el producto químico se unirá a la perla antes de ser liberado. Algunos compuestos se unen tan fuertemente que están esencialmente nunca liberados de las perlas en la columna y nunca se miden en la solución que sale de la columna.

técnicas de separación de laboratorio típicos implican el desarrollo de un ensayo o método de separación, y luego la aplicación de dicho ensayo para separar los compuestos individuales a partir de una solución. Sin embargo, esto da lugar generalmente a múltiples soluciones que también deben someterse a procedimientos, lo que lleva a un aumento exponencial de la complejidad. Aunque HPLC menudo puede simplificar y acelerar este proceso, el coste de desarrollar un aparato de HPLC puede llegar a ser enorme. El desarrollo de un aparato de HPLC, aunque mucho más eficiente, es mucho más costoso que el desarrollo de otros ensayos para la separación de compuestos. Esto hace que no sea económicamente viable para muchos pequeños laboratorios de propiedad privada.

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HPLC no sólo se utiliza para separar compuestos simples, sino que también se usa para aislar proteínas específicas de una mezcla celular. En este caso las perlas en la columna generalmente se recubren con un anticuerpo específico para la proteína es necesario recoger. Las proteínas se unen la de los anticuerpos y la solución restante se pasa a través de la columna, a continuación, las proteínas se liberan utilizando otra solución y se recogió. Esto requiere un técnico altamente especializado para monitorear la columna en todo momento y asegurarse de que el proceso se está ejecutando exactamente como estaba previsto.