Tipos de columnas de HPLC

Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es un tipo de cromatografía de columna diseñado para separar y clasificar los componentes de una muestra basada en sus interacciones con una columna específica. HPLC es distinta, ya que utiliza un entorno más presión para propulsar las muestras de líquido a través de la columna densamente poblado-manera más eficiente. Tres tipos de columnas de HPLC son de uso común hoy-difieren en la naturaleza del material de embalaje de recubrimiento de la columna y la interacción con la muestra.


La columna de intercambio iónico

  • Video: Prácticas de Química Orgánica I: Cromatografía en columna

    Video: Cromatografía de líquidos de alta eficiencia

    Los experimentadores utilizan cromatografía de intercambio iónico cuando la separación de muestras ionizables, o muestras que pueden cargarse. La fase estacionaria, que es el material sólido que recubre la columna y la interacción con la muestra, posee una carga opuesta a la de la muestra de interés, de manera que la muestra será atraído a las paredes de la columna. Esta atracción se ralentiza el tiempo de elución, o el tiempo que se tarda en pasar todo el camino hasta la columna en la fase móvil, de la muestra. Los más cargadas las partículas de la muestra son, más atraídos estarán a la fase estacionaria, lo que resulta en un tiempo de elución más lenta. Los tiempos de elución representan la fuerza de la carga de las partículas, y por lo tanto son los principales medios de clasificación de los distintos compuestos dentro de la muestra.

La columna de adsorción

  • Como su nombre indica, la adsorción de cromatografía de funciones a través de una fase estacionaria adsorbente. La adsorción, que no debe confundirse con la absorción, implica la unión temporal de las partículas de la muestra a la fase estacionaria de la columna. El grado en que una partícula de muestra puede adsorber a la fase estacionaria está determinada por la polaridad relativa, o la carga, que la partícula puede poseer en un momento dado. Esto varía de cromatografía de intercambio iónico en que las partículas no se cargan de manera explícita, sino que son ligeramente positivo o negativo a veces a medida que gira de partículas y vibra. A medida que la partícula se mueve hacia abajo de la columna, se adsorbe y DE-adsorbe en diversos grados basados ​​en el nivel de la polaridad que posee. tiempos de elución proporcionan una medida de nivel de polaridad de las partículas de la muestra.

La columna de exclusión por tamaño

  • Video: Thermo Scientific - Columnas para Cromatografía de gases

    Tamaño-Cromatografía de Exclusión utiliza una técnica de separación diferente a la de intercambio iónico o cromatografía de adsorción. Este tipo de columna es menos común que los otros dos, pero es útil cuando la separación de grandes biomoléculas como proteínas o hidratos de carbono. La fase estacionaria se compone de partículas no cargadas, que son de tamaño controlado y poroso. Cuando la muestra es disparado a través de la columna, las partículas de menor tamaño son absorbidos temporalmente en el revestimiento de columna, mientras que las partículas más grandes pasan directamente a través y se eluyen primero. La fase estacionaria está diseñado de manera que cuanto menor sea la partícula, más profundamente en el revestimiento columna que penetra, lo que significa que las partículas más pequeñas tendrán la mayor cantidad de tiempo para volver a la superficie y se eluye. Las muestras se pueden clasificar de acuerdo con el tiempo de elución, lo que corresponde directamente al tamaño de partícula.

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