Cómo solucionar un HPLC doble pico

cromatografía líquida de alto rendimiento, o HPLC, es una técnica utilizada para separar los compuestos en una solución mixta. Un tubo de metal lleno de perlas de sílice, llamado una columna de HPLC, se utiliza para separar la solución antes de que se detecta por el detector de HPLC. Un doble pico del detector de lectura por lo general implica que algo más está contaminando el sistema. La mayoría de las veces, el problema radica en la columna de HPLC.

  • Determinar qué tipo de disolvente está siendo inyectada en el sistema HPLC. Si el disolvente es más fuerte que la fase móvil líquida que pasa, sin embargo, se puede producir de división de picos. Una solución rápida es usar el mismo disolvente en la fase móvil como disolvente en la muestra. Si persiste el problema, la columna de HPLC puede estar contaminada.

  • Lavar la columna mediante el bombeo de 100 por ciento de metanol o acetonitrilo aunque el sistema de HPLC durante al menos 15 minutos. Esto eliminará materiales fuertemente unidos unidas a la columna. Invertir la columna y llevar a cabo el mismo procedimiento con el mismo disolvente. Este proceso eliminará cualquier materia en partículas que puede estar obstruyendo la frita-un filtro situado en la parte delantera de la columna. Si la cromatografía continúa mostrando dobles picos, la columna se ha ensuciado con contaminantes fuertes.

  • Con la columna en la dirección inversa, la bomba 25 ml de agua a 1 ml por minuto. Entonces lavar la columna con 25 ml de isopropanol, cloruro de metileno y hexano sucesivamente. Vuelva a conectar la columna en la dirección correcta y lavar la columna con 25 ml de disolvente de fase móvil. Si el pico doble persiste, reemplace la columna.

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