Componentes básicos de un HPLC
cromatografía líquida de alto rendimiento es una técnica para el análisis de laboratorio de una mezcla. Es un tipo eficiente de cromatografía que utiliza alta presión, en lugar de simplemente la gravedad, para propulsar una muestra de una mezcla a través de una columna. Se inyecta una muestra, entonces una bomba que contiene altas cantidades de presión ayuda a mover la muestra a lo largo de una columna de relleno, donde se separa en componentes individuales. Esta separación se analiza a continuación por un detector para producir resultados.
Contenido
- Lugar de la inyección
- Componente de bomba
- Video: cromatografía de líquidos de alta eficiencia
- Columna descripción
- Función detector
- Video: cromatografía. divulgación científica (iqog-csic)
Lugar de la inyección
Con el fin de ser inyectado en un HPLC, una muestra primero debe ser disuelto en un disolvente líquido polar, preferiblemente uno con espectros de HPLC conocida de modo que sus datos se pueden distinguir de la muestra de. La solución líquida que contiene la muestra se coloca en el instrumento y se envía en la columna. La ubicación real del punto de inyección depende de la marca de instrumentos. En la mayoría de los casos, el proceso de inyección está automatizado, pero en algunos casos, un trabajador de laboratorio debe inyectar la muestra utilizando una pequeña aguja de la jeringa.
Componente de bomba
Video: Cromatografía de líquidos de alta eficiencia
El componente de la bomba de la unidad de HPLC es necesario, ya que proporciona la presión que impulsa a la muestra a través de la columna. la fuerza de la bomba varía, pero una poderosa uno puede producir una presión de hasta 6.000 psi, o libras por pulgada cuadrada, que se aplica después de que se inyecta la muestra. Esto permite que la muestra pase a través de la columna más rápidamente y eficazmente que si fuera a gotear a través de el uso de sólo la fuerza de la gravedad.
columna Descripción
El aumento de la velocidad de una muestra pasa a través de la columna mediante una bomba permite el uso de un tipo diferente de la columna que los utilizados en cromatografía líquida simple. El material de embalaje en la columna puede tener un tamaño de partícula mucho más pequeño, lo que aumenta el área de superficie y por lo tanto ayuda a las interacciones de la muestra con la columna. La mayoría de las columnas de HPLC de trabajo a través de la polaridad. La muestra se disuelve en un disolvente polar, y la columna se compone de hidrocarburos en gran parte no polares. Las piezas polares de la molécula de la muestra pasan a través de la columna muy rápidamente debido a que están interactuando principalmente con el disolvente, mientras que los componentes no polares de la muestra permanecen en la columna, la formación de interacciones débiles con los componentes de la columna. Por lo tanto, los componentes de la muestra salen de la columna en orden de más polar a más no polar.
función detector
Video: Cromatografía. Divulgación científica (IQOG-CSIC)
Detectores también varían en función del tipo de instrumento de HPLC siendo utilizados. Sin embargo, la mayoría funcionan de la misma forma básica. Una fuente de luz ultravioleta brilla en los componentes de la muestra separados medida que salen de la columna. La mayoría de los compuestos orgánicos absorben una cierta cantidad de luz, por lo que a medida que pasan por el haz de luz aplicada, un detector puede recoger la cantidad de luz absorbida. El detector también registra el tiempo de retención de los componentes basado en el orden en que salen de la columna. Esta salida puede entonces ser analizado sobre la base de área de pico para determinar la naturaleza exacta de los componentes de la muestra.