Cómo realizar una HPLC

Realización de una prueba de HPLC (cromatografía líquida de alto rendimiento) es una habilidad técnica que sólo debe ser llevada a cabo por personal entrenado. HPLC se ha utilizado cada vez más en los laboratorios desde la década de 1980. Se utiliza para la investigación y en laboratorios y universidades para separar e identificar moléculas orgánicas complejas o compuestos. El sistema se puede ejecutar en fase normal o invertida.



Video: Cromatografía de líquidos de alta eficiencia

Video: Cromatografía. Divulgación científica (IQOG-CSIC)

La máquina de HPLC consiste en un depósito, desgasificador, inyector, columna unido al horno y detector, integrador y software (ver Recurso 1).

Cosas que necesitará

  • Software
  • Computadora
  • HPLC
  • cubo de residuos
  • Reactivo (metanol / agua)
  • pH (papel de tornasol)
  • Electricidad

HPLC funcionando

  • Encender la máquina HPLC siguiendo las instrucciones del fabricante. Configurar la instrumentación (ver referencia 1). Ajuste de la HPLC correctamente es el aspecto principal de esta prueba y no es una técnica estándar. Elige el método correcto para las sustancias que se analizaron en HPLC.

    Colocar la columna de la derecha de la manera correcta después de la colocación de flecha muestra. Establecer la longitud de onda a ser capaz de detectar los compuestos complejos. Establecer la temperatura adecuada.

    Lavar la columna con 50% de metanol y agua durante 30 minutos. Dejar que la fase móvil pase a través.

    Ajustar la cuota de flujo como se indica en la metodología.

  • La fase móvil de HPLC es crítica y resultados satisfactorios depende de si la preparación se ha realizado correctamente (véase la referencia 2). Hay dos tipos de fase móvil utilizada en HPLC, elución en gradiente o isocrática. La elución en gradiente es donde se necesitan dos fases móviles orgánicas, en diferentes momentos. Con elución isocrática, sólo se requiere una fase orgánica (metanol / agua).

  • Video: HPLC sus Partes 1

    Asegúrese de que la máquina de HPLC y el ordenador están conectados a través de un cable RS232 para permitir que la información fluya entre las dos máquinas (véase la referencia 3).

  • Preparar la muestra de acuerdo a la especificación en la metodología. Elige el método analítico específico deseado y registrada en el ordenador.

    HPLC elegir el correcto cuando hay muchas máquinas de HPLC vinculados. Ir al instrumento y abra la lista de muestras.

    Abrir una ventana y escribir el nombre y la fecha de la prueba. Guardarlo.

  • Video: Inyección manual en HPLC

    La lista de ejemplos aparecerá en forma de diagrama. Complete los datos de la gráfica de la muestra que ha preparado.

    Colocar los viales de muestra correctamente en la máquina de acuerdo con la metodología. Presione START para comenzar el análisis.

Consejos advertencias

  • Todos los pasos en HPLC y la preparación de la muestra deben ser correctos con el fin de evitar una repetición de la prueba. investigaciones repetición cuestan tiempo y dinero.
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